注射用甲氨喋呤用于，一、各型急性白血病，特别是急性淋巴细胞白血病、恶性淋巴瘤、非何杰金淋巴瘤和蕈样肉芽肿、多发性骨髓病。二、恶性葡萄胎、绒毛膜上皮癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、睾丸癌。三、头颈部癌、支气管肺癌，各种软组织肉瘤。四、高剂量用于骨肉病，鞘内注射可用于预防和治疗脑膜白血病，以及恶性淋巴瘤的神经侵犯。本品对银屑病也有一定的疗效。四氢叶酸是在体内合成嘌呤核苷酸和嘧啶脱氧核苷酸的重要辅酶。本品作为一种叶酸还原酶抑制剂，主要抑制二氢叶酸还原酶，而使二氢叶酸不能还原成，有生理活性的四氢叶酸，从而使嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸的生物合成过程中，一碳基团的转移过程受阻，导致DNA的生物合成受到抑制。本品主要作用于细胞周期的S期，属于细胞周期特异性药物。
在使用本品的过程中应当注意，一、已知对本品高度过敏的患者禁用。二、应用本品期间，禁止怀孕及哺乳。三、儿童每日1.25毫克至5毫克，视骨髓情况而定。四、老年人用药，未进行该项实验，且无可靠参考文献。五、全身极度衰竭，恶液质或并发感染，及心肺肝、肾功能不全时，禁用本品。六、用药期间应严格检查血象，肝、肾功能不全患者慎用。大剂量用药时，注意补液，碱化尿液及四氢叶酸钙的应用。
